Dissertação/Tese PERFIL DE EXPRESSÃO GÊNICA NA GLÂNDULA SALIVAR E NO INTESTINO DE Thaumastocoris peregrinus - PPGCF

Conhecido popularmente como Percevejo bronzeado, o Thaumastocoris peregrinus é uma praga que tem causado severos danos em plantações de eucalipto em todo mundo. Por se tratar de uma praga recente, poucos são os estudos relacionados ao seu controle. Atualmente, com o avanço da biologia molecular, inúmeras são as técnicas que podem auxiliar na descoberta de uma forma eficaz de controle, que seja menos prejudicial ao meio ambiente. As diferentes técnicas de análise da expressão gênica se iniciam com a extração do RNA total do material em estudo. Para análises de genômica funcional, é indispensável que o RNA esteja íntegro. Uma variedade de protocolos de extração de RNA de insetos está disponível, porém nenhum deles é amplamente eficaz, pois vários fatores e características intrínsecas do tecido a ser analisado podem afetar esta integridade e qualidade do material extraído. Assim, quase sempre é necessário adaptar e modificar os protocolos com a finalidade de otimizar a extração dos ácidos nucleicos. Este estudo objetivou analisar a eficiência de três métodos para extração de RNA total de Thaumastocoris peregrinus: o Kit comercial “RNeasy Mini-kit” (Qiagen), o protocolo que utiliza o reagente comercial D-Sorbitol (Sigma) e o outro protocolo que utiliza o Tris reagente (Sigma), bem como, indicar qual é o método mais eficaz para uso em insetos. Os resultados obtidos demonstraram que o RNA extraído com o método do Kit comercial “RNeasy Mini-kit” foi o único protocolo capaz de aliar a quantidade, qualidade e integridade do RNA extraído à repetibilidade da técnica. No entanto, ele pode ser facilmente substituído pela utilização de D-Sorbitol (Sigma) devido ao seu baixo custo, fazendo-se necessárias adaptações que permitam a obtenção de uma maior quantidade de RNA extraído. Dos três protocolos testados apenas o Tris reagente (Sigma), não foi eficiente na extração de RNA do T. peregrinus. Considerou-se o RNeasy Mini Kit (QIAGEN) como método preferencial para extração de RNA em T. peregrinus. Salienta-se que a determinação de um protocolo eficiente para a extração de RNA do T. peregrinus irá auxiliar em pesquisas futuras, a exemplo da expressão gênica e técnicas como a RNAseq, que auxiliam na descoberta de genes presentes na amostra de RNA extraído.

Popularly known as Tanbug, Thaumastocoris peregrinus is a pest that has caused severe damage to eucalyptus plantations worldwide. As it is a recent pest, there are few studies related to its control. Currently, with the advancement of molecular biology, there are countless techniques that can assist in the discovery of an effective form of control, which is less harmful to the environment. The different techniques of analysis of gene expression start with the extraction of the total RNA from the material under study. For functional genomics analysis, it is essential that the RNA is intact. A variety of insect RNA extraction protocols are available, but none of them are widely effective, as several factors and intrinsic characteristics of the tissue to be analyzed can affect this integrity and quality of the extracted material. Thus, it is almost always necessary to adapt and modify the protocols in order to optimize the extraction of nucleic acids. This study aimed to analyze the efficiency of three methods for extraction of total RNA from Thaumastocoris peregrinus: the commercial kit “RNeasy Mini-kit” (Qiagen), the protocol that uses the commercial reagent D-Sorbitol (Sigma) and the other protocol that uses the reagent Tris (Sigma), as well as, indicate which is the most effective method for use in insects. The results obtained demonstrated that the RNA extracted with the commercial kit method “RNeasy Mini-kit” was the only protocol capable of combining the quantity, quality and integrity of the extracted RNA with the repeatability of the technique. However, it can be easily replaced by the use of D-Sorbitol (Sigma) due to its low cost, making adaptations necessary to obtain a greater amount of extracted RNA. Of the three protocols tested, only the reagent Tris (Sigma) was not efficient in extracting RNA from T. peregrinus. The RNeasy Mini Kit (QIAGEN) was considered as the preferred method for RNA extraction in T. peregrinus. It should be noted that the determination of an efficient protocol for the extraction of RNA from T. peregrinus will assist in future research, such as gene expression and techniques such as RNAseq, which assist in the discovery of genes present in the extracted RNA sample.