Dissertação/Tese DESENVOLVIMENTO DE UM IMUNOSSENSOR EMPREGANDO RESSONÂNCIA DE PLÁSMON DE SUPERFÍCIE PARA DETERMINAÇÃO DA PROTEÍNA C-REATIVA - PPGQ

As doenças cardiovasculares (DCV) são as principais causas de mortes em todo o mundo. O diagnóstico rápido das DCV é extremamente importante e crucial, não só para garantir a sobrevivência do paciente, mas também trás uma economia significativa para o país. A proteína C-reativa (PCR) tem sido frequentemente utilizada como biomarcador para o risco cardiovascular (RCV). Pesquisas recentes sugerem que os pacientes com níveis elevados de PCR estão com um risco aumentado de hipertensão, bem como de doenças cardiovasculares. Neste contexto, este trabalho tem por objetivo o desenvolvimento de um imunossensor eficiente, sensível, seletivo e estável, fundamentado em espectroscopia de ressonância de plásmons de superfície (SPR), explorando a interação antígeno/anticorpo da proteína C-reativa. Nesse trabalho será empregada a técnica de Ressonância de Plásmons de Superfície (SPR) na investigação da imobilização de anticorpos da PCR sobre a Monocamada Auto-Organizada (SAM, do inglês self-assembled monolayer) de ácido mercaptoundecanóico (MUA), ativado pela mistura de 1 mol L-1 1-etil-3-(3-dimetilaminopropil)carbodiimida (EDC) e 1,5 mol L-1 de N-hidroxisuccinimida (NHS). Com o propósito de investigar a capacidade da SAM de MUA frente à imobilização do anticorpo da PCR (Ac-PCR) fez-se o estudo da interação da SAM de MUA frente ao Ac-PCR mediante a obtenção de sensogramas para diferentes concentrações do Ac-PCR (10, 20, 30, 40 e 50 µg mL-1). Em seguida, após a escolha da concentração do Ac-PCR, fez-se os estudos da interação do Ac-PCR imobilizado em diferentes concentrações do antígeno de PCR (Ag-PCR) (1, 5, 20, 30, 50 e 70 µg mL-1). Conforme pode ser observado, há uma relação linear entre o deslocamento do ângulo SPR e o aumento na concentração do Ag-PCR (com R2 de 0,992). Tais resultados são um indicativo da eficiência da SAM confeccionada em imobilizar o Ac-PCR e em detectar Ag-PCR de forma simples e eficiente. Foi realizado também o estudo de regeneração, que mostrou ser possível realizar diversas análises sem perda significativa no sinal. A partir da imobilização do anticorpo sobre a SAM de MUA, foi possível desenvolver um imunossensor capaz de detectar baixas concentrações do Ag-PCR. Neste sentido, o sistema proposto apresenta grande potencial para se tornar uma alternativa para diagnóstico simples e rápido para a PCR.

Cardiovascular diseases (CVD) are leading cause of death worldwide. Rapid diagnosis of CVD is extremely important and crucial, not only to ensure the survival of the patient, but also brings significant economy for the country. The C- reactive protein (CRP) has often been used as a biomarker for cardiovascular risk (RCV). Recent research suggests that patients with high CRP levels are at an increased risk of hypertension and cardiovascular diseases. In this context, this work aims to the development of an efficient immunosensor, sensitive, selective and stable, based on surface plasmon resonance (SPR), exploring the interaction antigen/ antibody of C - reactive protein. This work exploits the surface plasmon resonance in investigation of the immobilization of CRP antibodies on a Self-Assembled Monolayer (SAM , the self - assembled monolayer English) of mercaptoundecanoic acid (MUA), activated by mixing 1 mol L-1 1-ethyl-3-(3- dimethylaminopropyl) carbodiimide (EDC) and 1.5 mol L 1 N -hydroxysuccinimide (NHS). In order to investigate the ability of SAM to immobilize the CRP antibody (Ab-PCR ) were carried out studies to the interaction of SAM MUA with Ac- PCR by SPR to several concentrations of Ab-PCR (10, 20, 30, 40 and 50 µg ml-1). Then, after choose the best concentration of Ac-PCR, were carried out studies of the interaction of Ab-PCR immobilized with different concentrations of AgPCR (1, 5, 20, 30, 50 and 70 µg ml-1). As can be seen, there is a linear relationship between the displacement angle of the SPR and the concentration of Ag-PCR (with R2 0.992). These results are indicative of the efficiency of the MUA SAM in immobilize Ac-PCR and detecting Ag-PCR in a simple and efficient form. It was also carried out study of surface sensor regeneration, which shows to be possible to perform various analyzes without significant loss in signal. Therefore, the immobilisation of PCR antibody on the SAM MUA opens a new possibility to develop an immunosensor capable to detect low concentrations of Ag-PCR. In this sense, the proposed system is a alternative for simple and rapid diagnosis for PCR.