Dissertação/Tese AVALIAÇÃO DO EFEITO DA AMIDAÇÃO DA ANGIOTENSINA I E II NA PRESSÃO ARTERIAL E NA INTERAÇÃO PEPTÍDEO-MEMBRANA - PPGQ

O sistema Renina-Angiotensina-Aldosterona (SRAA) é caracterizado por diversas reações que auxiliam no equilíbrio da pressão arterial, quantidade de sódio e água no organismo. No SRAA a renina secretada cliva a porção N-terminal do angiotensinogênio, resultando no peptídeo angio I (DRVYIHFHL) que, pela ação da enzima conversora de angiotensina (ECA), sofre clivagem entre os resíduos F8 e H9, produzindo o peptídeo denominado angio II (DRVYIHPF). Pequenas modificações nas regiões N- e C-terminais, como a amidação, são comumente observadas em peptídeos e proteínas, consistindo em uma das últimas etapas na maturação que ocorrem após a ação de endoproteases e exoproteases. Neste sentido, o presente trabalho visa investigar o efeito da amidação das angiotensinas I e II na reatividade vascular, em alterações cardiovasculares e na interação com membranas fosfolipídicas. Para isso, os peptídeos amidados e não-amidados (nativos) foram sintetizados pelo método de síntese de peptídeos em fase sólida via estratégia Fmoc, purificados por cromatografia líquida de alta eficiência (CLAE) e caracterizados por espectrometria de massas com ionização por eletrospray (EM - ESI). A afinidade e interação com membranas fosfolipídicas de 1-palmitoil2-oleoil-fosfatidilcolina (POPC) e 1-palmitoil-2-oleoil-fosfatidilglicerol (POPG) foram avaliadas tanto por calorimetria de titulação isotérmica (ITC) quanto por espectroscopia de impedância eletroquímica (EIE), revelando que os peptídeos angio I e angio II apresentam maior interação com membranas de zwitteriônicas em comparação com as membranas aniônicas e, ainda, que a amidação eleva a afinidade dos peptídeos pelas membranas. Por fim, testes de reatividade vascular e alterações cardiovasculares foram realizados em ratos Wistar, revelando efeito atenuado no aumento da pressão arterial das angiotensinas após a amidação. Os resultados sugerem que a amidação na região C-terminal dificulta a conversão da angio I pela ECA e que os peptídeos amidados tendem a interagir mais com a membrana, podendo deixá-los menos disponíveis para interação com os receptores de membrana responsáveis pelo sistema SRAA e, consequentemente, atenuando o aumento da pressão arterial dos ratos.

The Renin-Angiotensin-Aldosterone System (RAAS) is characterized by several reactions which act on the blood pressure balance and on the amount of sodium and water in the body. The secreted renin of RAAS cleaves the angiotensinogen N-terminal portion, resulting in the peptide angiotensin I (DRVYIHFHL), which undergoes enzymatic cleavage (angiotensinconverting enzyme - ACE) between residues F8 and H9 producing the peptide angiotensin II (DRVYIHPF). Its known that modifications at the N- and C-terminal regions, such as amidation, are commonly observed in peptides and it consist of one of the last stages in the maturation process that occurs after the endoproteases and exoproteases actions. In this sense, the present work aims to investigate the effect of the amidation of angiotensins I and II on the vascular reactivity, cardiovascular alterations and peptide-membrane interaction. For this, amidated and ron-amidaded (native) peptides were synthesized through the solid-phase peptide synthesis method via Fmoc strategy, purified by hig-performance liquid chromatography (HPLC) and characterized by electrospray ionization mass spectrometry (ESI - MS). The affinity and interaction peptides with 1-palmitoyl-2-oleoyl-phosphatidylcholine (POPC) and 1-palmitoyl-2-oleoyl-phosphatidylglycerol (POPG) were evaluated through isothermal titration calorimetry (ITC) and electrochemical impedance spectroscopy (EIE), revealing that both angio I and angio II have greater interaction with zwitterionic membranes compared to anionic membranes. In addition, the interaction data revealed that the amidation increases the peptide-membrane affinity. Finally, vascular reactivity and cardiovascular alterations assays were performed by using Wistar rats, revealing an attenuated effect on blood pressure increase of angiotensins after amidation. These results suggest that amidation in the C-terminal region hampers the conversion of angio I by ACE, incressing the affinitf of both peptides with membranes as well. This greater tendency for membrane interaction could make the amidated peptides less available to bind with the membrane receptors responsible for the RAAS system, which could possibly result in a altenuation of the raise in blood pressure in rats.